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凋亡和焦亡的區(qū)別
細(xì)胞凋亡與細(xì)胞焦亡同為細(xì)胞程序性死亡，均可出現(xiàn)染色質(zhì)凝聚、核濃縮以及均依賴半胱天冬酶，但二者在諸多方面都大相徑庭，其具體區(qū)別如下：
細(xì)胞凋亡 | 細(xì)胞焦亡 | ||
概念 | 在一定的生理或病理條件下，受內(nèi)在遺傳機制控制，按照自身程序主動性、生理性的死亡過程 | 又稱細(xì)胞炎性壞死，炎性小體引發(fā)的一種程序性細(xì)胞死亡方式 | |
誘導(dǎo)刺激 | 生理或病理 | 病理性刺激 | |
特征 | 無炎癥反應(yīng)、凋亡小體形成 | 明顯的炎癥反應(yīng)、焦亡小體形成 | |
形態(tài)學(xué) | 細(xì)胞 | 縮小 | 腫脹膨大 |
細(xì)胞膜 | 結(jié)構(gòu)完整 | 破裂 | |
細(xì)胞器 | 完整 | 變形 | |
DNA | 降解為180-200bp及其整倍數(shù)的片段 | 隨機降解 | |
核形態(tài) | 核固縮(邊緣染色質(zhì)不可逆的凝結(jié))和DNA片段化 | 染色質(zhì)濃縮、沒有DNA斷裂 | |
分子機制 | Caspase-2/-3/-6/-7/-8/-9/-10，其中,caspase-3為細(xì)胞凋亡的主要調(diào)控因子 | 人源性的caspase-1/-4/-5和鼠源性的caspase-1/-11 | |
細(xì)胞焦亡檢測
原理：炎性小體激活可控制caspase-1的活化和裂解,導(dǎo)致效應(yīng)性促炎細(xì)胞因子,如IL-1β前體和IL-18前體的成熟和釋放,引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)。焦亡相關(guān)的caspase是裂解GSDMD導(dǎo)致細(xì)胞焦亡的zui強因素。
1. 形態(tài)變化
? 掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)
? TUNEL染色
? 免疫熒光染色（gasdermin D，GSDMD）
2. 檢測焦亡相關(guān)蛋白
? 檢測焦亡相關(guān)基因或蛋白的表達(dá)水平（Caspase-1、4、5、11；GSDMD等）
? ELISA試劑盒檢測炎癥因子的水平（IL-1β、IL-18等）
? CCK-8測定細(xì)胞活力
細(xì)胞凋亡檢測
1. 凋亡早期
◆ 檢測指標(biāo)
◆ 原理
位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸（Phosphotidylserine, PS）由細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ（膜聯(lián)蛋白-V）是一種分子量為35-36kDa的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與PS高親和力結(jié)合，通過細(xì)胞外側(cè)暴露的PS與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。
◆ 客戶數(shù)據(jù)
2. 凋亡中期
◆ 檢測指標(biāo)
◆ 原理
線粒體膜電位（△Ψm ）的丟失導(dǎo)致線粒體膜中線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的開放，細(xì)胞色素C（Cytochrome C）被釋放到細(xì)胞漿中，致使Caspase被激活從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。JC-1是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△Ψm的理想熒光探針，表現(xiàn)出電勢依賴性的積聚在線粒體內(nèi)。正常線粒體內(nèi)，JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中形成聚合物，聚合物發(fā)出強烈的紅色熒光（Ex=585 nm，Em=590 nm）；而凋亡細(xì)胞，線粒體跨膜電位去極化，JC-1從線粒體內(nèi)釋放，濃度降低，逆轉(zhuǎn)為發(fā)射綠色熒光的單體形式。線粒體的去極化程度也可以通過紅/綠熒光強度的比例來衡量。
◆ 客戶數(shù)據(jù)
圖4.熒光探針檢測U87細(xì)胞樣本實驗結(jié)果
3. 凋亡晚期
◆ 檢測指標(biāo)
◆ 原理
染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將熒光素/酶標(biāo)記的dUTP結(jié)合到DNA的3-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)。
◆ 客戶數(shù)據(jù)
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